Transformation
Beispiel: E.-coli-Bakterien
Damit die Bakterienzellen den Vektor aufnehmen können, muss eine Transformation durchgeführt werden. Sie kennen diesen Begriff bereits von den Experimenten, die Griffith durchgeführt hatte.
Transformation steht für verändern. Durch das Einbringen des Vektors wird die Bakterienzelle verändert, also transformiert.
Merke
Transformation = Veränderung
Methode
Erinnern Sie sich nochmals an das Experiment von Griffith. Auch er hat den Begriff Transformation verwendet!
Damit die Bakterienzelle den im Laborexperiment verwendeten Vektor aufnehmen kann, wird sie durch Salzbehandlung (in der Regel Calciumchlorid) „kompetent gemacht". In diesem kompetenten Zustand hat sie die Fähigkeit, Vektor-DNA aufzunehmen.
Bakterienzellen und Vektor-DNA werden in einem Reagenzgefäß zusammengemischt und einem Hitzeschock ausgesetzt. Ein gewisser Anteil der Bakterienzellen hat nach dieser Prozedur das Vektor-Molekül aufgenommen und ist somit transformiert.
Die Selektion auf transformierte Bakterien erfolgt in der Regel über Antibiotikaresistenzen, die in der Vektorsequenz codiert sind.
Antibiotika-Resistenzen werden in der Regel in Bakterien durch die Anwesenheit einer Plasmid-DNA vermittelt.
Dabei liegt die Geninformation, die für die Ausbildung einer Resistenz eingesetzt wird gängigerweise auf einem Plasmid.
In der Gentechnik wird dies tagtäglich eingesetzt um einen schnellen und eindeutigen Nachweis zu haben, ob eine Transformation funktioniert hat.
Hat das Bakterium die Plasmid-DNA aufgenommen?
Wenn ja, muss es auch die Antibiotika-Resistenz exprimieren können. Daher setzt man Selektivmedien, also Wachstumsmedien mit Antibiotikazusatz ein.
Nur Bakterienzellen, die das Plasmid erhalten haben, können überleben.
Stempeltechnik
Vektoren mit mehrfachen Antibiotikaresistenzen können zur Stempeltechnik eingesetzt werden.
Besitzt ein Vektor neben dem "normalen" Sequenzabschnitt für eine Antibiotikaresistenz eine weitere, in der multiple-cloning-site lokalisierte, so kann dies für den Nachweis einer erfolgreichen Klonierung direkt eingesetzt werden.
Bei erfolgreicher Klonierung wird die Antibiotika-Resistenz in der multiple-cloning-site zerstört.
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